Циль нильсен окраска


Суть метода

Циль нильсен окраска

Окрашивание по Цилю-Нильсену позволяет окрасить бактерии, которые устойчивы к воздействию кислот. К таким относятся возбудители туберкулёза, в том числе легочных форм, и лепры. При данной диагностической пробе их окраска получается контрастной по отношению к остальной части мазка.

Сначала подготовленный мазок обрабатывают фуксином Нильсена, нагревают на горелке. Это повторяют несколько раз, добавляя краситель. Затем излишки фуксина смывают водой и обесцвечивают мазок раствором серной кислоты. Следующий этап — окраска метиленовым синим, к которому чувствительно всё, кроме кислотоустойчивых бактерий и структур.

Для диагностики туберкулёза лёгких используют различные методы исследования мокроты, которая выделяется при кашле у пациентов с этой патологией. Этот способ диагностики позволяет дифференцировать болезнь и подтвердить факт выделения микобактерий в окружающую среду.

Это далеко не единственная методика, но она используется практически во всех лабораториях, где происходит определение микобактерий. Обычно анализ проводят перед началом противотуберкулёзной терапии и несколько раз во время лечения.


Правила проведения анализа

Для наиболее точного результата первый забор материал для исследования должен происходить до начала приёма медикаментов, контейнеры для мокроты можно брать только стерильные. Также крайне нежелательно, чтобы между моментом забора материала и его исследованием прошло более часа, особенно летом.

Необходимо следить за тем, чтобы мокрота как можно меньше контактировала с ротовой полостью. В таком случае результат может получиться искаженным. Перед окраской по Цилю-Нильсену проводится обработка диагностического мазка по Грамму. Если количество лейкоцитов и эпителиальных клеток высокое, что является признаком того, что мокрота из носоглотки, а не нижних дыхательных путей, стоит повторить забор материала.

Положительный результат

Циль нильсен окраска

При окраске по методике Циля-Нильсена микобактерии туберкулёза окрашиваются контрастно по отношению к остальной части мазка.

Признаки положительного результата:

  • Видны яркие малиновые или красные палочки на светлом синем или голубом фоне.
  • Внутри бактерий можно увидеть вкрапления более интенсивной окраски.
  • Обычно палочки тонкие и прямые, но возможны единичные изогнутые формы.
  • Иногда встречается слегка полосатая, неоднородная окраска из-за наличия участков с различной устойчивостью к действию красителей с кислой реакцией.

Длина, интенсивность, толщина палочек немного зависит от их возраста (растущие или взрослые формы) и метода выделения (выращенная на питательной среде, от больного до или после терапии).

Но в любом случае внешний вид микобактерий достаточно специфичен, что сводит к минимуму вероятность ложного положительного результата.

Плюсы и минусы метода

Основным минусом диагностики туберкулёза лёгких окраской по Цилю-Нильсену является то, что при начальных стадиях болезни в мокроте содержится слишком маленькое для обнаружения количество микобактерий или они вообще не выделяются.

Но плюсов гораздо больше:

  • Исследование проходит очень быстро, результаты готовы через несколько часов после сдачи диагностического материала.
  • Используются доступные для большинства лабораторий реактивы.
  • Метод даёт возможность сделать вывод о том, выделяется ли палочка наружу, то есть определить степень заразности (открытая или закрытая форма туберкулёза).
  • Помогает быстро и недорого диагностировать тяжелые формы с неблагоприятным прогнозом.
  • Материал для исследования можно взять быстро и безболезненно и у взрослых, и у детей, кроме самых маленьких.

Проведение нескольких проб у одного пациента повышает вероятность выявления микобактерий в мазке, если он болен. Результат считается позитивным, даже если палочка туберкулёза была обнаружена только в одном из 3 исследований. В сомнительных ситуациях назначаются дополнительные анализы.

Источник: elaxsir.ru

Область применения метода

Этот метод окрашивания используется в тех случаях, когда необходимо выявить в образце кислотоустойчивые микроорганизмы, к которым относятся возбудители туберкулеза, проказы и микробактериозов. Такие бактерии характеризуются, прежде всего, медленной скоростью роста, общими морфологическими особенностями, а также устойчивостью к кислотам и некоторым другим химическим веществам. Из-за последнего свойства такие бактерии плохо поддаются окраске обычными разведенными красителями. Для окрашивания таких бактерий на препарат наносится и в дальнейшем поджигается фуксин Циля, причем полученная окраска не исчезает под воздействием спирта и кислот.

Лабораторные анализы мокроты

Необходимые реактивы и оборудование

Для проведения окраски образца по методу Циля-Нильсена необходимы следующие реактивы:


  • Метиленовый синий с 10%-ным содержанием спирта;
  • Раствор солянокислого спирта;
  • Фуксин Циля, состоящий из фенола, фуксина и этилового спирта в количестве 50 г, 10 г и 10 г соответственно.

Также потребуется следующие инструменты:

  • Газовая горелка;
  • Часы для слежения за временем;
  • Вода;
  • 96%-ный этиловый спирт;
  • Перчатки.

Нагревание анализов при окраске по Циль-Нильсену

Ход процедуры

Окрашивание по методу Циля-Нильсена состоит из следующих этапов:


  1. На мазок, находящийся на предметном стекле, накладывается фильтровальная бумага, на которую затем наносится небольшое количество фуксина Циля.
  2. Затем предметное стекло нагревается до появления характерного пара. После появления пара стеклу нужно дать остыть. Затем нужно повторить эту процедуру еще 2 раза, а затем дать подогретому мазку остыть.
  3. После этого нужно смыть фуксин с приборного стекла, предварительно убрав бумагу, с помощью дистиллированной воды.
  4. Затем стекло помещается в раствор соляной или серной кислоты до полного обесцвечивания.
  5. Наконец, на обесцвеченный препарат наносится раствор метиленового синего. Стекло промывается дистиллированной водой и высушивается для дальнейшего исследования образца под микроскопом.

Липиды, которые содержатся в клеточной стенке кислотоустойчивых бактерий, хорошо удерживают цвет основного красителя. В некислотоустойчивых бактериях стабильно удерживается цвет как основного красителя, так и дополнительного.


Показания к применению метода

При подозрениях на туберкулез исследуется мокрота больного. Длительный кашель с обильными выделениями является показанием для проведения подобного исследования. Визуально наличие возбудителей туберкулеза в организме может выдать мокрота характерной жидкой, пенистой консистенции и признаками гноя, а также мокрота, смешанная с кровью. Обнаружение возбудителей туберкулеза – рисовидных телец, известных также как линзы Коха, облегчается при использовании методов окраски образца. Таких как вышеописанный метод Циля-Нильсена или метод Грама, суть которого будет описана ниже.

Метод Грама

Окраска препарата по методу Грама проводится следующим образом:

  • Сперва препарат обрабатывается раствором Люголя на протяжении минуты;
  • Затем препарат обесцвечивается с использованием спирта;
  • Наконец, препарат промывается с использованием воды и дополнительно окрашивается фуксином.

Классификацию бактерий на грамположительные и на грамотрицательные можно наглядно увидеть при проведении подобной окраски. Первый тип бактерий окрашивается в темно-фиолетовый цвет, тогда как второй тип – в красный цвет. Исходя из такой классификации, можно судить о химическом составе клеточной стенки бактерии и о других ее характерных свойствах.

Заключение


Анализ мокроты пациента является жизненно необходимым для своевременного выявления заболеваний, затрагивающих дыхательные пути, в том числе и туберкулеза. Окрашивание по методу Циля-Нильсена помогает выявить микроорганизмы и возбудители подобных болезней. В том числе и в случаях, когда речь идет об атипичных бактериях. Тем самым позволяет производить более точную и качественную диагностику подобных болезней.

Окраска микобактерий по Циль-Нильсену

Если вы сталкивались с подобными заболеваниями, знакомы с техниками исследования анализов больного на предмет наличия в них возбудителей инфекции или же у вас есть вопрос по теме, вы можете оставить свой комментарий.

Источник: ChahotkiNet.ru

8. Механизмы окрасок по Граму и Цилю-Нильсену


Метод Грама. Относится к сложным методам окраски и позволяет дифференцировать грамположительные и грамотрицательные бактерии, что является важным таксономическим признаком. Результат окраски определяется особенностями строения клеточной стенки бактерий. При окраске генцианвиолетом и последующем воздействии раствора Люголя образуется комплексное соединение генцианвиолета и йода с пептидогликаном, которое при дифференциации спиртом удерживается в клетках грамположительных бактерий, имеющий многослойный пептидогликан и вымывается из грамотрицательных бактерий, имеющих тонкий слой пептидогликана. При дополнительной окраске водным раствором фуксина грамотрицательные бактерии приобретают красный цвет.

Таблица 4. Метод Грама

Этапы окраски

Цвет бактерий

  1. На фиксированный мазок поместить фильтровальную бумажку, пропитанную генцианвиолетом, смочить водой, 2-3 минуты

Все бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет

  1. Снять бумажку, слить с препарата оставшуюся краску и налить раствор Люголя на 1 минуту


Все бактерии остаются фиолетовыми

  1. Для дифференцирования нанести на мазок этиловый спирт и обесцветить в течение 30-60 с, промыть водой

Грамположительные бактерии остаются фиолетовыми, грамотрицательные обесцвечиваются

  1. Нанести фуксин Пффейфера (водный раствор фуксина) и докрасить 1-2 мин, промыть водой, высушить

Грамположительные остаются фиолетовыми, грамотрицательные окрашиваются в красный цвет

Метод Циля-Нильсена. Относится к сложным методам окраски и позволяет дифференцировать кислотоустойчивые и некислотоустойчивые бактерии.

Таблица 5. Метод Циля-Нильсена

Этапы окраски

Цвет бактерий

  1. На фиксированный мазок нанести карболовый раствор фуксина Циля через полоску фильтровальной бумаги и подогреть препарат в пламени горелки до появления паров (повторить 3-4 раза)


Все бактерии окрашиваются в красный цвет

  1. Снять бумагу, промыть мазок водой

Все бактерии остаются красными

  1. Для дифференцирования нанести 5% раствор серной кислоты на 1-2 минуты

Кислотоустойчивые бактерии остаются красными, некислотоустойчивые обесцвечиваются

  1. Нанести водный раствор метиленового синего и докрасить 3-5 мин, промыть водой, высушить

Кислотоустойчивые остаются красными, некислотоустойчивые окрашиваются в синий цвет

Кислотоустойчивые бактерии имеют особое строение клеточной стенки, содержащей большое количество сложных липидов (миколовых кислот, восков, глико- и фосфолипидов), что делает эти бактерии кислото-, щелоче- и спиртоустойчивыми. Клеточная стенка этих бактерий плохо воспринимает анилиновые красители и обычные способы окраски. Высокая температура в процессе окраски методом Циля-Нильсена расплавляет липиды, фенол разрыхляет клеточную стенку и краситель проникает внутрь клетки. После остывания препарата липиды вновь затвердевают, прочно удерживая краситель, поэтому кислотоустойчивые бактерии не обесцвечиваются серной кислотой и остаются красными. Некислотоустойчивые бактерии обесцвечиваются и их докрашивают контрастным красителем – метиленовым синим. В основном, метод используется для окраски бактерий, относящихся к роду Mycobacterium (M.leprae, M.tuberculosis, M,bovis и др.)

Источник: StudFiles.net


Leave a Comment

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Этот сайт использует Akismet для борьбы со спамом. Узнайте как обрабатываются ваши данные комментариев.